高效轉染各種真核細胞1.0mL
- 型號： GT1211-02
- 更新時間： 2024-06-02
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產品名稱 :
High Efficiency Transfection Reagent
高效轉染各種真核細胞
品牌 :
BIOMIGA
貨號 :
GT1211-01
規格 :
0.5mL/1ml/1.5ml/6ml
詳細信息 :
說明 : | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
可用于150次6-孔板或3.5mm培養皿的細胞轉染。 GeneTran是一種新型的脂質體和多聚物混合的轉染試劑，可用于各種真核細胞系的質粒轉染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染，如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴細胞、昆蟲細胞（sf9, sf21, High-Five）。有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。 主要特點
保存條件
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存12個月。使用之前請先將試劑瞬時離心。
質粒轉染步驟
以下步驟是用于35mm培養皿或6孔培養板轉染真核細胞的。若用于其他規格培養皿的轉染，請參考表1的用量。所有的數據和體積都是每孔的用量。對于絕大多數的細胞系和原代細胞，質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合。有時優化條件也是必須的（參見質粒DNA轉染條件的優化，第5頁）。 A. 轉染貼壁細胞（35 mm培養皿或6孔培養板） 轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度。 1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：
* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min。 3. 將混合液加入細胞培養皿中，晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。 注：血清濃度對于轉染效果無影響，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。 4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可 檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養液。 5. 如果要得到穩定細胞株，請在轉染24小時后按1:10傳代培養。
B. 轉染懸浮細胞（35 mm培養皿或6孔培養板） 轉染時保證細胞超過90%的密度 1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：
* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40分鐘。 3. 將混合液加入細胞培養皿中，晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。 注：血清濃度對于轉染效果無影響，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。 4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養液。 5. 如果要得到穩定細胞株，請在轉染24小時后按1：10傳代培養。表1各種細胞培養板轉染推薦用量
前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞。 對于C2C12肌肉細胞系，FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%，而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%：
對于其他細胞系，可參考以下方法優化條件： A． 在35mm培養板中將質粒量增加到3μg，4μg和6μg。 B． 在35mm培養板中將GeneTran增加到15μL。 C． 如果轉染效率較高，但死細胞較多，可降低質粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時間到5-24小時。 D． 可按下表優化條件：
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