淋巴細胞分離液操作步驟是哪些？
更新時間：2021-10-31 1994
淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細胞的密度差異，通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。淋巴細胞分離液操作步驟是哪些？
使用操作步驟：
(1)取新鮮抗凝全血或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
(2)在離心管中加入適量分離液，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。
(3)室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min。
(4)離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。
(5)小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mLPBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。
(6)棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。
(7)重復(fù)步驟6；
(8)棄上清，細胞重懸備用。
淋巴細胞分離液的原理：
外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。
基本應(yīng)用：
可用于體外分離外周淋巴血細胞，也可以從其他來源中分離單核細胞，包括臍帶血細胞和骨髓細胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
